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透射荧光显微镜与反射荧光显微镜的区别及优缺点
发布时间: 2022-03-08  点击次数: 831次

透射荧光显微镜与反射荧光显微镜的区别及优缺点

        1、透射荧光显微镜:激发光源通过聚光镜穿过试样材料激发荧光。常用暗场聚光器,也可使用普通聚光器,调节反射镜使激发光向试样转移和侧射。这是一种相对老式的荧光显微镜。优点是在低倍率下荧光强,但缺点是随着倍率的增加荧光减弱。因此,最好观察较大的试样材料。
         2、落射荧光显微镜:这是现代发展起来的一种新型荧光显微镜。不同之处在于激发光从物镜下落到试样表面,即照明聚光器和收集荧光的物镜使用同一个物镜。需要在与光学铀成 45 度角的光路中添加二色分束器。激发光被反射到物镜中并集中在样品上。样品产生的荧光被物镜表面和盖玻片表面反射。同时,激发光进入物镜,返回二向色分光镜,使激发光和荧光分离,剩余激发光被阻挡滤光片吸收。例如,可以使用不同的激发滤光片/双色分光镜/阻挡滤光片的组合来满足不同荧光反应产物的需要。这种荧光显微镜的优点是视野均匀,成像清晰,放大倍数越大,荧光越强。
        透射荧光显微镜的优缺点
        光源:高压汞灯或卤素灯。
        聚光镜:使用暗场聚光镜来分离激发光和荧光。
        目标:可以使用任何类型的目标。
        标本:因为是透射观察,薄标本比较适合。
        优点:①由于使用了暗场聚光镜,激发光不能进入物镜,因此容易形成暗背景并获得良好的对比度,任何物镜都可以进行观察。 ② 使用低倍物镜时,比反射荧光显微镜更亮。
        缺点:聚光镜的中心和高度必须调整正确,否则无法获得明亮的荧光图像。由于暗场聚光镜的焦距限制,不能使用厚载玻片。视场的照明面积不宜过大,否则荧光标本的荧光颜色很容易褪色。不适用于厚的或不透明的样品。
        反射荧光显微镜的优缺点
        光源:高压汞灯或卤素灯。
        聚光镜:由于物镜充当聚光镜,因此不需要聚光镜。
        事物镜子:使用的物镜必须透过足够的紫外光,本身不产生荧光,对数值孔径没有限制。
        标本:可以观察到厚标本或不透明标本。
        优点:①由于物镜兼作聚光镜,无需进行多次调整。 ②孔径光阑和视场光阑的效果可以通过使用Korra照明法来发挥。 ③物镜的数值孔径不受限制,在高倍率下也可以获得高分辨率的图像。 ④也可以观察厚或不透明的标本,也可以使用厚盖玻片。 ⑤其他观察方法也可与反射荧光结合使用,特别是与相差法和透射微分干涉差法结合使用。 ⑥可避免不必要的荧光褪色现象。
        缺点:使用地倍率物镜时,成像比较暗,必须使用数值孔径大的物镜。滤光片系统必须有效地分离激发光和荧光。

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